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干细胞养殖的凋一火小体（ABs）具有权臣的免疫调度和组织再生后劲，绝顶是在糖尿病伤口支援方面，但其在组织局部寄递应用时，淹留时期短，易被快速废除。已有参谋标明，选择甲基丙烯酰化明胶 (GelMA)水凝胶微球负载凋一火小体可减速其废除率，能有用促进伤口愈合。

本期，EFL以发表在杂志《Med》的“Balancing macrophage polarization via stem cell-derived apoptotic bodies for diabetic wound healing”参谋为例，默契怎样欺骗微流控本事制备GelMA水凝胶微球 (GMS) 以抛弃 ABs 的开释，用于支援糖尿病伤口。

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为什么继承GelMA 微球

水凝胶微球凭借其私有的结构、出色的组织相容性、可打针性和小尺寸，已成为组织工程中的热点载体。传统水凝胶会羁系细胞洞开，减速伤口愈合。可打针多孔水凝胶微球可提供更大的空间，使细胞更容易通过，增强细胞挪动智商，从而加速伤口愈合速率。水凝胶微球，包括甲基丙烯酰化明胶 (GelMA) 微球 (GMS)、甲基丙烯酰化透明质酸 (HAMA) 微球 (HMS) 和海藻酸钙微球 (CAMS)，已普通应用于不同鸿沟的合成材料载体。GMS 因其邃密的生物相容性、生物降解性和机械强度而闪现出促进伤口愈合的出路，这些特质与皮肤的特质相配相同。 本参谋发现 AB@GMSs 具有邃密的生物相容性，权臣延长了 ABs 的局部废除，改善了糖尿病伤口炎症并促进了血管化，从而促进了伤口愈合。

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怎样制备GelMA 微球负载ABs

（1）GMS的制备：将冻干GelMA和光激发剂LAP在预措置的水相中搀杂。通过将山梨醇单油酸酯分散在石蜡油中来制备油相，微流抛弃备的水凝胶微球在轮回制冷泵上通过蓝光交联，交联完成后用丙酮和去离子水洗涤三次，将制备的微球冷冻干燥。

（2）ABs@GMS 的制备：将 2 mg 制备的冻干微球溶化在含有不同浓度 ABs的 PBS 溶液中，通过浸没式吸附工艺将 ABs 吸附到 GMS 中。（图1）。

图1 AB@GMS 的制备过甚对伤口局部巨噬细胞的调度暗示图

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GelMA负载AB的上风和作用

（1）AB@GMS 的表征

在光学显微镜下，细胞核闹翻和细胞名义造成水泡状和芽状突起，不错显着指引细胞凋一火，这些突起慢慢从细胞均分袂，最终造成 Ab。选择透射电子显微镜 （TEM）证实分袂AB 的局势和大小。笔据 western blot 遵守，ABs 抒发高水平的细胞凋一火相关标志物，包括 C3b、C1QC、H3.3 和 H2B。通过卵白质浓度分析 （BCA） 证实 ABs 的产量。ABs 的大小约为 772.45 nm，开释弧线闪现，ABs在 7 天内收场从GMS中有用的缓释，因此，GMS 是有用的聚拢药物寄递系统，通过扫描电子显微镜 （SEM） 不雅察负载 ABs 的水凝胶微球的多孔结构 ，不雅察到制备微球的均匀大小。随后，通过荧显豁微镜不雅察负载 ABs 的水凝胶微球的含量，可见ABs镇静开释，笔据元素能谱，GMS 中的主要元素为 C、N、O，而 AB 负载的 GMS 中的主要元素包括 C、N、O、P 和 S，讲明了 ABs 的负载（图2）。

图2 AB 和 AB@GMSs 的表征

（2）AB@GMSs的生物相容性和促血管造成智商

将东谈主脐静脉内皮细胞 （HUVECs） 在 96 孔板中培养 12 小时，CCK-8 测定遵守闪现，当 ABs 浓度为 1μg/mL 时，细胞活力最高，当 AB 浓度高于 1 μg/mL 时，细胞活力略有着落，标明通盘浓度的 ABs 均无细胞毒性，可用于后续细胞执行。活死染色遵守闪现，培养 1 天和 3 天后，大大批细胞存活，标明 AB@GMSs 具有邃密的生物相容性。荧显豁微镜闪现，HJC黄金城官方首页入口在 0 h 和 2 h 时，巨噬细胞尚未吞吃 Dil 染色的 Abs，相悖，在 4h 时，在细胞内发现红色荧光，说明巨噬细胞吞吃了 ABs。Transwell 遵守闪现，AB 刺激巨噬细胞产生的分泌物激烈促进了 HUVEC 的挪动（图3）。

图3 AB@GMSs的生物相容性、巨噬细胞吞吃作用以及对体外内皮细胞挪动的影响

（3）AB@GMSs 指引大鼠糖尿病伤口愈合

为了参谋 ABs 与 AB@GMSs 在体内的漫衍，通过在糖尿病 Sprague-Dawley （SD） 大鼠中制备全层伤口来构建炎症性皮肤伤口模子。在第 1、5、 14 和 21 天神用体内成像系统监测 DiD 象征的 ABs 和 DiD 象征的 AB@GMSs 的保留，在不同时间点，与 DiD ABs 比拟，DiD AB@GMS组在伤口周围阐发出增强的荧光强度和更长的保留时期。为了进一步参谋 ABs 在体内的愈合促进作用，不雅察了大鼠的伤口，发现第 7 天后，AB@GMSs 支援的非愈合区显着小于对照组和 GMS 组，第 3 周，AB@GMS组阐发出最有用的伤口愈合，伤口面积权臣松开，H&E 染色遵守闪现，AB@GMS 组和 AB 组的伤口长度短于对照组和 GelMA 组，其中 AB@GMS 组最短，对照组最长，伤口的炎症细胞在 AB@GMS 组中最少，在对照组中最多，Masson染色遵守闪现，AB@GMS 组的胶原卵白含量最高，罗列最有序。

图4 AB@GMSs 促进 ABs 在伤口处保存的智商并促进伤口愈合

（4）AB@GMSs 调度体内炎症并促进胶原卵白千里积和血管再生

在慢性不愈合的糖尿病伤口中，炎症陆续会执续更长的时期。第 7 天，与 GelMA 和对照组比拟，AB@GMS 组和 AB 组的 IL-1β 和 TNF-α 浓度权臣缩短。M2 巨噬细胞在遏制过度炎症和促进组织再生方面起着至关伏击的作用。CD86为 M1 巨噬细胞的名义标志物，CD206为 M2 巨噬细胞的名义标志物，F4/80是熟习巨噬细胞的名义标志物。与其他组比拟，AB@GMS组在伤口部位皮基层不雅察到的CD86细胞（红色荧光）较少， M1 巨噬细胞的百分比为对照组的 34.8%，也低于 GelMA 或 AB 组 ，在 AB@GMS 组中不雅察到 CD206 细胞漫衍更广（橙色荧光），用 AB@GMSs 支援的伤口中 M2 巨噬细胞的比例比对照组、GelMA 或 AB 组高 2.62 倍，标明AB@GMSs 在体内有用刺激巨噬细胞向 M2 型极化。血管生成是伤口愈合阶段的要道历程，免疫荧光 （IF） 染色闪现 AB@GMS 支援伤口中有权臣的血管生成，AB@GMS 组真皮中α-SMA 和 CD31 抒发权臣升高，新发胶原卵白密度计数闪现 AB@GMS 组真皮中 COL1 和 COL3 抒发权臣高于其他组，这些遵守标明，AB@GMSs 权臣诱发了更高水平的 M2 巨噬细胞极化，并促进了伤口愈合中的细胞增殖和血管生成，从而大大加速了伤口愈合（图5）。

图5 AB@GMSs 促进 ABs 在伤口处保存的智商并促进伤口愈合

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回来

该参谋构建了载有细胞合成 ABs 的缓释生物合成水凝胶微球系统，以收场 ABs 的执续活性，发现GMS 能有用地为 ABs 的保存和执续镇静开释提供生态位，与周围细胞和组织造成共生微环境。此外，AB@GMSs的局部注入减少了材料的过度集中。体外和体内执行遵守标明，ABs 均衡巨噬细胞极化，促进组织再生，并改善组织愈合。总而言之，AB@GMSs克服了 ADSCs 的多向分化、致瘤性和体内半衰期短等几个问题HJC黄金城(GoldenCity)官网首页，从而为均衡巨噬细胞极化和促进慢性创伤等炎症性疾病的组织再生提供了邃密的临床继承。